龈沟液中MMP-8的水平及MMP-8/TIMP-1比值在牙周炎症水平判断中的临床价值

安 琪,王新刚

(1.长春市口腔医院 牙体牙髓科，吉林 长春130051;2.吉林大学中日联谊医院,吉林 长春130033)

慢性牙周炎主要发病原因为牙龈长期炎症向深部牙组织进展[1-2]。相关研究显示牙龈炎可逐渐转化为牙周炎，加强对该病进行早期诊断，这对逆转治疗结局有十分重要的意义[3]。龈沟液(GCF)检测可以对牙周组织的病理、生理学状态进行评估[4]。基质金属蛋白酶(MMP)可将胞外基质进行降解，是一种可对牙周组织产生破坏的蛋白溶解酶，多由炎性渗出细胞(如中性多核白细胞、炎性状态下的成纤细胞等)分泌[5]。临床实验学研究表明MMP-8约为GCF中胶原酶蛋白总量的80%，且牙周疾病活动性越强，牙周疾病点位MMP-8浓度显著升高[6]。MMP抑制剂(TIMP)可对患者机体MMP水平及其活性具有调节作用，其中TIMP-1的调节作用最强，可与大多数MMP之间相结合[7]。本研究主要探讨龈沟液中MMP-8水平及MMP-8/TIMP-1比值在牙周炎症中的临床价值，现报道如下。

1.1 一般资料根据美国牙周病分类研讨会(1999年)提出的慢性牙周炎的相关诊断标准，对牙周相关指数进行记录，并将2018年7月至2019年7月长春市口腔医院的75例受试者分为牙周健康组(n=29)、慢性龈缘炎组(n=24)及慢性牙周炎组(n=22)。每名受试者均选取一颗第一或者第二磨牙作为受试牙，其中慢性牙周炎患者每牙选择牙槽骨吸收量最大点作为受试牙位。3组受试者在性别、年龄方面的差异均无统计学意义(P均>0.05)。

1.2 纳入及排除标准纳入标准：(1)均符合慢性牙周炎的相关诊断标准；
(2)均为首次确诊以及住院之前未接受过自主治疗者；
(3)治疗依从性较好，对本研究方案知情；
(4)均经医院伦理委员会批准。排除标准：(1)排除慢性咽喉炎等口腔局部炎性疾病者；
(2)住院前3个月之内既往接受过免疫抑制剂或抗生素治疗者；
(3)孕产妇；
(4)不愿接受本研究方案者。

1.3 GCF的采集本研究应用滤纸条法对GCF进行收集，使用电子天平对事先裁剪好的规格为0.2 cm×1 cm的Whatman 3号滤纸条进行称重。选择合适的牙位，将上述规格的滤纸条插入到被选牙位的近中颊侧龈沟之中，过0.5 min将滤纸条取出，将其置入Eppendorf管之中。1 min之后重复上述操作，将两次取样的滤纸条置入同一Eppendorf管之中，进行称重，然后将其置于-20℃的冰箱中进行保存，待测。

1.4 GCF中MMP-8及TIMP-1检测方法采用双抗体夹心ABC-Elisa法对GCF中MMP-8及TIMP-1水平进行检测，实验中所使用的试剂盒及试剂均购自于上海钰博生物科技有限公司。

1.5 观察指标包括：(1)比较3组GCF体积；
(2)比较3组GCF中MMP-8、TIMP-1水平及MMP-8/TIMP-1比值；
(3)分析GCF中MMP-8水平与表征牙周相关指标[菌斑指数(PI)、出血指数(BI)、探诊深度(PD)及附着丧失(AL)]之间的相关性。

2.1 3组GCF体积对比随着被采牙位炎症程度增加，GCF体积随之而增加，P<0.05。见表1。

表1 3组GCF体积比较

2.2 3组GCF中MMP-8、TIMP-1水平及MMP-8/TIMP-1比值对比随着被采牙位炎症程度增加，3组受试者GCF中的MMP-8水平随之而显著升高(P<0.05)，3组受试者GCF中的TIMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)，3组MMP-8/TIMP-1比值随之而增大(P<0.05)，见表2。

表2 3组GCF中MMP-8、TIMP-1水平及MMP-8/TIMP-1比值比较

2.3 3组PI、BI、PD、AL比较3组患者PI、BI、PD和AL比较，慢性牙周炎组>龈缘炎组>对照组，差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 3组PLI、BI、PD、AL比较

2.4 3组GCF中MMP-8水平与表征牙周相关指标的相关性分析经Pearson秩相关性检验分析，GCF中MMP-8水平与表征牙周相关指标(PI、BI、PD及AL)存在显著的正相关性。见表4。

表4 3组GCF中MMP-8水平与表征牙周相关指标的相关性

研究表明宿主炎性介质可对牙周炎引起的牙周组织破坏具有介导作用，即牙周炎可使得破坏牙周组织的炎性细胞因子水平显著上升[8]。MMPs作为一种有效降解胞外基质的蛋白溶解酶，在牙周组织破坏过程中扮演着十分重要的作用，主要是对牙周支持组织产生降解破坏作用，并参与牙周组织附着丧失及牙槽骨吸收过程。多种MMPs均参与到牙周炎症进展过程[9]。Rathnayake等[10]指出，随着牙周炎发病程度增大，GCF中的MMP-8水平也随之升高，且显著高于正常牙周组织GCF中浓度(P<0.05)。Marcaccini 等[11]研究结果显示：慢性牙周炎患者GCF中的MMP-8水平要显著高于牙周正常患者(P<0.05)。本研究结果也显示随着被采牙位炎症程度增加，3组受试者GCF中的MMP-8水平随之升高(P<0.05)，此结果提示当牙周出现炎症时，会促使GCF中的MMP-8水平显著升高，且随着炎症程度增大，MMP-8水平也增加。

从表2可看出，3组受试者GCF中的TIMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。TIMP-1作为MMP-8的抑制剂，其对MMP-8有抑制作用，近年来在牙周疾病发病机理的研究中也成为一个热点。TIMPs与MMPs之间的平衡，能够对胞外基质的重塑起到调节效果，若二者失衡，则会引起组织的吸收。相关文献报道[12]，在健康牙周组织中，TIMP-1水平较高，但在牙周组织早期炎性病变时，TIMP-1水平则较低。然而，也有与之相反的结论，即在牙周组织发生炎症时，TIMP-1则处于较高水平，从而有效抑制MMPs对牙周组织的破坏作用[13-15]。Marcaccini等[11]通过研究发现慢性牙周炎患者GCF中的TIMP-1与牙周正常者差异无统计学意义，然而慢性牙周炎与牙周正常者MMP-8/TIMP-1比值存在显著的统计学意义，并推论MMP-8水平上升为引起上述比值失衡的主要原因。本研究中3组受试者GCF中的TIMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)，随着牙周病变程度的加大，3组MMP-8/TIMP-1比值随之增大(P<0.05)。

关于GCF中MMP-8水平与主要牙周指标间的相关性，有研究结果显示[16]，慢性牙周炎患者在经相关治疗后，GCF中的MMP-8水平显著降低，且同PI、BI、PD及AL等牙周相关指标之间存在一定的关联性。临床上，一般将PI、BI、PD及AL等指标作为评价牙周状况的重要指标，随着牙龈炎症症状的加重，牙周指数明显增大。有研究证实[17]，在通过有效的牙周治疗之后牙周炎患者的龈沟液中 MMP-8、水平会明显降低，而本研究结果显示，随着牙周炎症程度增大，牙周临床指数也会增大，患者GCF中的MMP-8水平也会随之而升高，经Pearson相关性分析结果显示，GCF中MMP-8水平与上述牙周指标之间存在正相关性。提示GCF中的MMP-8水平与牙周严重程度有很大关系，可作为评估牙周组织破坏程度的指标。

综上所述，随着牙周炎严重程度的增加，GCF中的MMP-8/TIMP-1比值随之而增加，因此，该比值对牙周炎的临床诊断具有重要的指导价值。

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