盐酸氮卓斯汀滴眼液对实验动物眼部的安全性评价试验

周艳艳，文皓頲，杨倚天，徐丽瑛，郑国安，张俊明

1.江西省医疗器械检测中心，江西省药物安全评价重点实验室，江西 南昌 330029；
2.江西中医药大学，江西 南昌330004

过敏性结膜炎（allergic conjunctivitis，AC）是眼科临床上较常见的疾病，可见眼部过敏产生的一些刺激性症状，如眼痒并伴有流泪、畏光、刺痛、分泌物等，结膜水肿同时眼睑肿胀，血管扩张或出血可导致眼结膜发红［1-2］。过敏性结膜炎通常分为几类亚型［3］：季节性结膜炎（SAC）、常年性结膜炎（PAC）、春季性角结膜炎（VKC）、巨乳头性结膜炎（GPC）和特应性角结膜炎（AKC），临床上以季节性和常年性较为常见。季节性角结膜炎患者经常伴随着出现相关的鼻部症状，诱发鼻结膜炎，特应性严重时，最终会导致视力下降，对患者日常生活产生不良后果。现代医学临床仍主要以眼局部用药缓解症状为主［4］。目前市售的盐酸氮卓斯汀滴眼液为原研进口药品，用于治疗过敏性结膜炎，效果良好。本试验通过在规定时间内观察各组实验兔经眼分别给药盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制）、赋形剂及原研药品对实验兔眼的刺激反应及反应程度，比较之间的区别，客观评价委托方生产的盐酸氮卓斯汀滴眼液可能存在的毒性反应［5-6］。

1.1 供试药物

供试品：盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制），规格：8 mL∶4 mg，由江西珍视明药业有限公司提供，批号：181102；
赋形剂：不含盐酸氮卓斯汀阴性溶液，规格：8 mL/支，由江西珍视明药业有限公司提供，批号：190501；
原研药品：盐酸氮卓斯汀滴眼液，规格：6 mL∶3 mg（0.05%），由Tubilux Pharma S.p.A 生产，批号：7M663A；
空白对照：0.9%氯化钠注射液，规格：250 mL∶2.25 g，生产单位：江西科伦药业，批号：D19040605-2。

1.2 实验动物

参照《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》［6］，本次实验采用普通级新西兰兔，自长沙市天勤生物技术有限公司购入，生产许可证号：SCXK（湘）2014-0010。雌雄各半，12～15 w，2.0～2.6 kg。购入动物饲养于江西省药物研究所安全评价中心，实验动物使用许可证号：SYXK（赣）2018-0008。

1.3 实验仪器及试剂

1.3.1 仪器LYL-Ⅱ裂隙灯（凤凰光学仪器集团）；
JS15-01 电子天平（上海浦春计量仪器有限公司）。

1.3.2 试剂荧光素钠（批号：C10530874，上海麦克林生化科技有限公司）。

2.1 给药前眼检查

给药前1 d 用裂隙灯显微镜检查实验兔的双眼，有存在眼及周围组织刺激症状、角膜缺陷和脸结膜、球结膜损伤的动物不能用于试验。

2.2 分组

将符合“2.1”要求的实验兔12 只分为3 组，赋形剂组、供试品组和原研药品组，每组各4 只，雌雄各半，按组别左眼分别给予赋形剂（不含盐酸氮卓斯汀阴性溶液）、盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制）和原研的盐酸氮卓斯汀滴眼液，各组右眼均给予0.9%氯化钠注射液作为空白对照，具体见表1。

表1 盐酸氮卓斯汀滴眼液实验兔眼刺激性试验分组设计

2.3 给药方式

用左右同体对照法，将滴眼液弃去2～3 滴，拉开实验兔左眼下眼睑呈杯状，各组实验兔分别滴入相应赋形剂溶液、盐酸氮卓斯汀滴眼液和原研药品各1 滴，然后轻合眼睑约10 s，实验兔右眼均滴入0.9%氯化钠注射液1 滴，轻合眼睑约10 s。2 次/d，每次给药间隔为6 h 左右，连续给药28 d。

2.4 观察项目

（1）给药期间，每日给药前用1%荧光素钠及裂隙灯对兔眼部进行检查，观察角膜、结膜、虹膜和其他损伤，并按表2 进行评分。（2）停药后，于末次给药后1、2、4、24、48 和72 h 用1%荧光素钠及裂隙灯对兔眼部进行检查，观察角膜、结膜、虹膜和其他损伤，并按《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》［6］标准（见表2）进行评分。如存在损伤，再延长21 d 的观察期。（3）在给药前1 d 和停药后的观察期（1、2、4、24、48 和72 h）对实验兔给药部位进行拍照。（4）按表2 的要求，将每只动物所有的评分分值相加得总分，将总分与动物数求均值，即得最后分值。按《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》［6］中的标准（见表3）判断其刺激程度。

表2 眼刺激反应分值标准

表3 眼刺激性评价标准

2.5 结果

2.5.1 给药前眼检实验兔在给药前双眼裂隙灯检测，未发现眼及眼周组织的刺激症状、角膜缺陷及结膜损伤等异常情况，可用于试验，如图1 所示。

图1 给药前24 h眼检结果

2.5.2 多次给药试验眼检三组实验兔左眼分别滴入盐酸氮卓斯汀滴眼液、赋形剂和原研药品，局部用药及停药后，用药部位结膜、虹膜及角膜均未发现异常，眼睑无水肿，未见异常分泌物，眼刺激反应平均积分均为0。实验兔右眼滴入空白溶液作为自身对照，局部用药部位结膜、虹膜及角膜均未发现异常，眼睑无水肿，未见异常分泌物，眼刺激反应平均积分均为0，结果见图2、表4。

图2 末次给药后72 h眼检结果

表4 盐酸氮卓斯汀滴眼液实验兔眼刺激性试验结果评价表（n=4）

过敏性结膜炎是一种变态反应性的眼表疾病，近年来，随着生活环境和气候的变化，化妆品的广泛应用，其发病率呈逐年增长的趋势［7］。该病首要的治疗就是快速缓解患者的眼痒、眼红等不适症状。氮卓斯汀滴眼液可在10～20 min 内显著缓解过敏性结膜炎导致的眼睛瘙痒、分泌物渗出、血管舒张，并在治疗7 d 后抑制炎症细胞浸润和黏附分子-1的表达。抗组胺药物也是治疗变态性结膜炎的常用药物，氮卓斯汀是对组胺H1 受体具有高亲和力的酞菁酮衍生物，对H2 受体也具有一定的亲和力［8］，通过拮抗呼吸道H1 受体，氮卓斯汀可阻断大鼠肥大细胞、兔和人嗜碱性细胞对组胺的释放，对白三烯和血小板聚集因子产生拮抗活性，从而抑制肥大细胞及其他细胞介导的过敏反应。另外还可抑制体内IgE 介导的炎症反应［9-10］。盐酸氮卓斯汀可明显改善结膜炎，能有效改善炎症因子指标水平，促进泪膜恢复。

刺激性是非口服途径给药制剂对局部产生的毒性，为临床前安全性评价的组成部分。眼刺激性是观察滴眼液是否引起眼及其周围黏膜的红肿、充血、变性等炎症性改变。实验兔眼睛对于药物刺激性较为敏感，因此，通过兔眼结膜囊内给予受试物，对于滴眼液安全性评价，其是重要内容之一［11］。本实验参照《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》［6］和Draize 试验［5］，以新西兰兔为研究对象，通过比较委托方提供的受试物与受试物所使用的辅料（赋形剂）对实验兔眼的刺激性，以判断受试物和赋形剂是否会产生刺激性和产生刺激性的原因；
对委托方生产的盐酸氮卓斯汀滴眼液与原研药品对实验兔的眼刺激进行试验和评价，比较受试物与原研药的刺激性反应症状是否一致，评估受试物临床用药的安全性。本研究给药方式、给药量及频次与临床拟用方案一致，采用结膜囊内给药，每天2 次，1 滴/次。受试物在临床上为长期应用药物，根据指导原则［6］，选择最长的给药时间28 d。结果表明，受试物、赋形剂及原研药品三者的刺激记分均为0，与自身对照无明显的区别，按刺激判断标准受试物对实验兔眼无刺激性，提示同条件下三者对实验兔眼均未发现与给药有关的刺激性反应，停药后也均未观察到与药物有关的刺激性反应，委托方生产的盐酸氮卓斯汀滴眼液与原研药品局部用药安全性均较好，具有广阔的临床使用前景。

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