美国车厘子外植体初代培养的污染控制方法研究 外植体灭菌及其初代培养

　　摘 要：以酒精、氯化汞、次氯酸钠作为试验材料，对美国车厘子进行去污处理。通过3种试剂的不同组合，研究处理时间及组合的差别对美国车厘子污染率和萌芽率的影响。结果表明，选择幼嫩外植体，先以75%酒精处理15 s，然后用HgCl2处理5 min可得到最佳的污染控制效果，且不影响发芽率。
　　关键词：组织培养；酒精；氯化汞；次氯酸钠
　　中图分类号：X53 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.02.045
　　
　　Research on Pollution Control Method of American Cherry Explant Culture
　　WANG Jin-feng
　　(Sijiao Tree Farms, Zhongtiaoshan State-owned Forest Management Bureau,Houma,Shanxi 043000,China)
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ: Used alcohol, mercuric chloride, sodium hypochlorite as experimental materials on cherries for decontamination.Studied the effect of pollution rate of treatment time and combination of difference on American cherry ,through three different combinations of reagents .The results showed that selecting young explants first soaked in 75% alcohol for 15 s, then HgCl2 for 5 min could get the best pollution control effect, and will not influence the rate of germination.
　　Key words: tissue culture ;alcohol;HgCl2;NaClO
　　
　　组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。众所周知，组织培养时污染物的控制对试验的成败有着十分重要的影响，对于植物的外植体而言，这一点显得更加重要，由于外植体长期生长在外界环境中，自身携带有大量的外生菌及内生菌，很难消毒，因此，笔者尝试研究在不同处理时间下对车厘子外植体和萌芽率的影响，探索较为有效的消毒方式，以期为组培初代培养的消毒提供一定的借鉴。
　　1 材料和方法
　　1.1 材 料
　　选择生长在山西省中条山一年生人工培养的美国车厘子作为试验材料，分别选取幼嫩外植体和较老外植体进行试验，互为对照。
　　用于消毒的试验试剂分别选择浓度为0.1%的HgCl2和浓度为0.2%的NaClO，并分别配合75%的酒精使用。
　　1.2 方 法
　　酒精及两种试剂对试验材料的处理时间如表1所示。
　　2 结果与分析
　　2.1 不同处理对车厘子外植体污染率和萌芽率的影响
　　由表2看出，处理时间越久，外植体污染率越低，萌芽率也较低；相同处理条件下，较老外植体的污染率较高，但却与幼嫩外植体有着相似的萌芽率；车厘子的萌芽率与酒精的处理时间呈现正相关，而污染率则与HgCl2的处理时间呈现负相关。
　　2.2 酒精和NaClO不同处理时间组合对车厘子外植体污染率和萌芽率的影响
　　通过表3我们可以看出，在这种处理条件下，依然是处理时间越久，外植体污染率越低，同时萌芽率也越低；较老外植体的污染率高于幼嫩外植体；萌芽率与酒精处理时间呈正相关，污染率与NaCl0处理时间呈负相关。这与表2所表现出的规律是相似的。
　　3 讨 论
　　综合几种组合对车厘子外植体污染率及萌芽率的影响，我们发现，相同处理时间组合条件下，酒精与HgCl2的组合均优于酒精与NaClO的组合，这种优势表现为较低的污染率及较高的萌芽率，这是组培试验中较为理想的结果。确定了酒精与氯化汞的组合后，我们可以看出，幼嫩外植体存在着较大优势，这种优势也体现为较低的污染率和较高的萌芽率，这就再一次简化了选择的过程，最后筛选出的组合只剩下4种，即A 15 s 75%酒精+3 min HgCl2，B 15 s 75%酒精+5 min HgCl2，C 30 s 75%酒精+3 min HgCl2， D 30 s 75%酒精+5 min HgCl2。而在这4种组合中，B的污染率略高于D,但萌芽率远高于D，因而认为B组合为最佳组合，所以最终确定在车厘子组培试验时，外植体初代培养首先应选择幼嫩外植体，然后用75%酒精处理15 s，接着用HgCl2处理5 min。
　　
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