河豚毒素生物检测法与荧光光度法的比较研究 荧光分光度法原理

　　摘要：为了比较生物检测法和荧光光度法检测河豚毒素（ＴＴＸ）的性能，使用昆明系小鼠与荧光光度法同时检测１０份织纹螺（Ｎａｓｓａｒｉｕｓ ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔｕｓ）中河豚毒素的含量。结果表明，荧光光度法与生物检测法之间具有较好的相关性。小鼠死亡时间的倒数与ＴＴＸ的注射量间的线性方程为ｙ＝０．００６ ９７ｘ＋０．００３ ６８，ｒ＝０．９９５，精密度为７．４％～１０．９％，回收率为９０．５％。荧光光度法中ＴＴＸ的浓度与荧光强度间的线性方程为ｙ＝３１８．０９ｘ＋８．６０，ｒ＝０．９９９，精密度为３．１％～６．６％，回收率为９８．７％。荧光光度法测定结果稳定，受外界因素影响小，且速度快，灵敏度高，在河豚毒素的定量检测及预防河豚毒素中毒方面有广泛的应用前景。
　　关键词：织纹螺（Ｎａｓｓａｒｉｕｓ ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔｕｓ）；河豚毒素；荧光分光光度法；小鼠生物检测法
　　中图分类号：Ｓ９６５．２２５；Ｏ６５７．３４ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）07－1450-03
　　
　　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ in Ｄｅｔｅｒｍｉｎing Ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ
　　
　　ＺＨＥＮＧ Ｄｉａｎ－ｙｕａｎ，ＸＩＡ Ｙｉ－ｙｉ，ＤＩＮＧ Ｚｈａｎ－ｐｉｎｇ
　　（Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ Teacher’s Ｃｏｌｌｅｇｅ / Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ ２２２００６， Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： For comparising the performance of bioassay method and fluorescence spectrophotometry in determining tetrodotoxin（TTX）， the ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＴＸ ｉｎ 10 Ｎａｓｓａｒｉｕｓ ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔｕｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｂｉｏａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｂｉｏａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｙ＝０．００６ ９７ｘ＋０．００３ ６８， ｒ ｗａｓ ０．９９５， ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｆｒｏｍ ７．４％ ｔｏ １０．９％， ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９０．５％． Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｙ＝３１８．０９ｘ＋８．６０， ｒ ｗａｓ ０．９９９， ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｆｒｏｍ ３．１％ ｔｏ ６．６％， ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９８．７％． Ａｓ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ was ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ， ｉｔ ｗｏｕｌｄ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｆｒｏｍ ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｎａｓｓａｒｉｕｓ ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔｕｓ； ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ； ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； mice ｂｉｏａｓｓａｙ method
　　
　　河豚毒素（ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ，ＴＴＸ）是一种剧毒的生物碱类天然神经毒素，为典型的神经通道阻断剂［１］，主要作用于肌肉神经生理活动［２］，由于该药具有相当强的镇痛作用，不产生耐药性［３］，因此极有可能成为新的局部麻醉药和戒除药物依赖性的药物。目前市场上的河豚毒素主要从河豚鱼的卵巢和肝脏组织中提取，另外织纹螺（Ｎａｓｓａｒｉｕｓ ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔｕｓ）等贝类也出现了季节性富集ＴＴＸ［４，５］，从而拓展了河豚毒素的来源，另一方面也对海产品带来了安全风险［６－８］，因此对海产品中的ＴＴＸ的检测，对于渔业生产及新药开发都有重要意义。
　　ＴＴＸ的检测主要有生物检测法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法、毛细管电泳法等［８－１０］。由于小鼠生物测定法具有快速、简单的特点，成为目前检测ＴＴＸ的主要方法，但由于小鼠个体差异，结果准确性较差，同时小鼠对ＴＴＸ缺乏特异性。荧光光度法特异性相对较强，误差较小，但来自样品的荧光物质也有干扰，因此在实际应用中各有利弊。对两种方法的比较研究，国内外未见相关报道，我们应用小鼠生物测定法和荧光光度法分别对ＴＴＸ进行检测，从而为海产品中ＴＴＸ的检测提供理论基础。
　　１ 材料与方法
　　１．１ 仪器与试剂
　　９７０ＣＲＴ型荧光分光光度计（上海分析仪器总厂），ＰＨＳ－３Ｃ型数字型酸度计（上海理达仪器厂）。河豚毒素标准品（河北省水产公司）；Ｔｒｉｓ、ＮａＣｌ、ＮａＯＨ（上海国药集团）。以上试剂除说明外均为分析纯。实验使用去离子水，使用前检查确定不含荧光杂质。
　　１．２ 小鼠生物检测法
　　依据日本官方检测河豚毒素的小鼠生物检测法， 采用目前通用的小鼠单位（ＭＵ）定义：３０ ｍｉｎ 内杀死１只２０ ｇ左右雄性ｄｄｙ品系的小鼠毒素量（１ ＭＵ＝０．２２ μｇ ＴＴＸ）［９］。腹腔注射小鼠， 观察小鼠的药物反应， 必须出现河豚毒素中毒的典型症状， 停止呼吸作为判断死亡的标准。由于ｄｄｙ小鼠不易获得，本试验采用昆明ＩＣＲ小鼠［１１］。
　　１．３ 荧光分光光度法
　　ＴＴＸ在碱性条件下加热生成２－羟基－６－羟甲基－８－羟基喹唑琳（也称Ｃ９碱），Ｃ９碱在３７０ ｎｍ激发，于４９５ ｎｍ处出现特征峰，荧光强度反映ＴＴＸ的含量。激发狭缝为１０ ｎｍ，发射狭缝２０ ｎｍ。速度为５００ ｎｍ／ｍｉｎ。
　　１．４ 标准曲线的绘制
　　１．４．１ 小鼠生物检测法 取１ ｍｇ ＴＴＸ标准品溶解于１０ ｍＬ容量瓶中， 制得浓度为０．１ ｍｇ／ｍＬ的标准品储备液，分 别 吸 取０．０３０、０．０３５、０．０４０、０．０４５、０．０５０、０．０５５、０．０６０、０．０６５ｍｌ 储备液稀释至 １０ ｍL， 浓度范围为３００～６５０ ｍｇ／ｍＬ，每个浓度取 ４ 个平行，分别腹腔注射 １９．５～２０．５ ｇ 体重的昆明 ＩＣＲ 品系雄性小鼠， 注射剂量为 １ ｍＬ，记录死亡情况及时间。根据死亡时间倒数与小鼠单位体重河豚毒素注射剂量绘制标准曲线。
　　１．４．２ 荧光分光光度计法［１２］ 溶液配制：２０ μｇ／ｍＬ ＴＴＸ储备液：取１ ｍｇ ＴＴＸ标准品溶解于１ ｍＬ重蒸水中，取２００ μＬ 定容至１０ ｍＬ；１６ ｍｏｌ／ｍＬ ＮａＯＨ储备液：取１６ ｇ ＮａＯＨ 加水溶解，用水定容至２５ ｍＬ；Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液：取２．４２ ｇ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ （ｐＨ ７．４）、５．８５ ｇ ＮａＣｌ、０．４７５ ｇ ＭｇＣｌ２、加水溶解，用水定容至１０００ ｍＬ； ０．０１～１．７ μｇ／ｍＬ ＴＴＸ碱解体系。
　　１．５ 河豚毒素的检测及回收试验
　　采用乙酸法提取ＴＴＸ，织纹螺经水洗后，去壳，取螺肉１０ ｇ，捣碎后与１００ ｍＬ ０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＨＡｃ充分混合［１３］，再煮沸１０ ｍｉｎ，调节ｐＨ至３．０，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清液，沉淀物用上述方法再提取２次，合并滤液，减压浓缩，再用氯仿抽提。浓缩液中再加入１０％的苦味酸，经煮沸后立即过滤，冷却后结晶出ＴＴＸ的苦味酸盐，晶体再用热水溶解，氨水调节ｐＨ至９．０，冷却后过滤，将沉淀用水洗涤，再溶于０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＨＡｃ中备用。四角蛤蜊（Ｍａｃｔｒａ ｖｅｎｅｒｉｆｏｒｍｉｓ）中添加一定量的ＴＴＸ，用上述方法进行添加回收试验。
　　２ 结果与分析
　　２．１ 生物测定法
　　２．１．１ 生物测定法标准曲线的绘制 结果如图１所示，线性方程为ｙ＝０．００６ ９７ｘ＋０．００３ ６８，ｒ＝０．９９５。自然界中尚存在诸如ＰＳＰ等贝类毒素也可使小鼠出现ＴＴＸ中毒的类似症状， 因此小鼠检测有误差干扰。同时不同个体的生理状况的差异也影响到检测的准确性。另外， 小鼠生物测定法检测限较高， 本试验检出限为０．２ μｇ／ｍＬ，其中以小鼠死亡时间６～８ ｍｉｎ相对准确，也影响该方法对微量ＴＴＸ的检测。
　　
　　
　　２．１．２ 小鼠生物测定法的精密度及加标回收试验 分别给小鼠注射低、中、高３个浓度（３００、５００、６５０ ｎｇ／ｍＬ）的ＴＴＸ，按照试验方法进行操作，在１ ｄ内分别测定５份样品的ＴＴＸ，计算日内精密度。每天各测定一份样品连续测定５ ｄ（ｎ＝３），计算日间精密度。以四角蛤蜊为材料，开展低、中、高３个浓度（３００、５００、６５０ ｎｇ／ｍＬ）的添加回收试验。结果见表１。
　　
　　２．２ 荧光光度法测定结果
　　２．２．１ 荧光光度法标准曲线的绘制 标准曲线如图２所示，线性方程为ｙ＝３１８．０９x＋８．６０， ｒ＝０．９９９，ｎ＝３，线性范围为０．０３～１．７０ μｇ／ｍＬ，检测限为０．０１５ μｇ／ｍＬ。
　　
　　２．２．２ 荧光光度法的稳定性测试 配制浓度为０．５ μｇ／ｍＬ的ＴＴＸ碱解体系，按照上述实验方法操作，放置０、３０、６０、９０、１２０ ｍｉｎ测定荧光强度，结果表明，在２ ｈ内荧光强度稳定。但反应体系在氙灯照射下，荧光强度在１５ ｍｉｎ后迅速下降。试验应在１５ ｍｉｎ内完成，此时的误差小于５％。
　　２．２．３ 荧光分光光度计法精密度及加标回收试验 平行配制低、中、高３个浓度（０．０５、０．７０、１．３０ μｇ／ｍＬ）的ＴＴＸ碱解体系，按照上述方法，在１ ｄ内分别测定５份样品荧光强度，计算日内精密度。每天各测定一份样品连续测定５ ｄ，计算日间精密度（ｎ＝３），以四角蛤蜊为材料，开展低、中、高３个浓度（０．０５，０．７，１．３ μｇ／ｍＬ）的ＴＴＸ碱解体系，测定回收率，结果见表２。
　　
　　
　　２．３ 方法比较
　　２．３．１ 方法相关性检验 对上述２种方法检测ＴＴＸ标准溶液结果进行相关性检验，得到的回归方程为ｙ＝２３．０９０ｘ－２７４．０６２，ｒ=０．９９６，Ｆ＝１１３１．８２８，P０．００１＜０．０１。说明用小鼠生物测定和荧光光度计法检测ＴＴＸ标准溶液呈极显著相关。
　　２．３．２ 结果相关性检验 对２种方法检测织蚊螺提取液的结果进行相关性检验，１０份不同织纹螺样品分别用小鼠生物测定法和荧光光度法进行检测，结果见表３。
　　得到的线性方程为ｙ＝０．５３５ｘ＋６．７３４，ｒ=０．７１６，Ｆ＝８．４３０，P＝０．０２０＜０．０５。说明用生物测定法和荧光光度法检测样品ＴＴＸ呈显著相关。荧光光度法检测值高于生物测定法，其原因是：①样品提取液中可能存在着一些使检测结果偏高的荧光物质［１４］，如蛋白质；②织纹螺提取液中存在一定量的河豚毒素衍生物，如河豚酸（ｔｅｔｒｏｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、４－表河豚毒素（４－ｅｐｉｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ）、脱水河豚毒素（ａｎｈｙｄｒｏｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ）等［１５］，它们可以产生荧光物质，但它们的毒力要远低于河豚毒素甚至无毒［１６］。
　　荧光光度法的精密度及回收率都大于小鼠生物检测法，由于是平行试验，提取方法引起的误差相对较小，因此精密度的差别主要是由于小鼠个体差异引起的。同样，回收率的差别也可归于小鼠个体差异。因此小鼠生物测定法测定ＴＴＸ过程中，应选择生理状态一致的个体，同时应进行个体重量校正，以最大程度减小试验误差。
　　３ 小结与讨论
　　小鼠生物检测法与荧光光度法检测样品中的ＴＴＸ的含量都有较高的准确性，但前者易受其他毒素［１７］及小鼠个体间差异的影响，后者对检测物中ＴＴＸ的纯度要求高，易受检测物中荧光杂质的影响。２种方法有较好的相关性，可以根据实际情况及对样品检测限要求的不同采用不同的方法。
　　参考文献：
　　［１］ ＭＡＲＵＴＡ Ｓ， ＹＡＭＡＯＫＡ Ｋ， ＭＡＲＩ Ｙ Ｙ． Ｔｗｏ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｐ－ｌｏｏｐ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｐｕｆｆｅｒ ｆｉｓｈ Ｎａ＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｏｎ ＴＴＸ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］． Ｔｏｘｉｃｏｎ， ２００８，５１：３８１－３８７．
　　［２］ ＧＨＩＡ Ｊ Ｅ，ＰＲＡＤＡＵＤ Ｉ， ＣＲＥＮＮＥＲ Ｆ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｏｒ ｔｒｙｐｓｉｎ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ ｒａｔ ｃｏｌｏｎｉｃ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｗｏ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｇｒａｎｉｎ Ａ［Ｊ］． Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，２００５，１２４：２７－３５．
　　［３］ 于翠萍，王长都，安建雄，等． 河豚毒素可能的镇痛机制及镇痛作用［Ｊ］． 中国处方药，２００９（３）：８２－８４．
　　［４］ ＷＡＮＧ Ｘ Ｊ， ＹＵ Ｒ Ｃ， ＬＵＯ Ｘ，ｅｔ ａｌ． Ｔｏｘｉｎ－ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｉｇｈｌｙ ｔｏｘｉｃ ｍａｒｉｎｅ ｇａｓｔｒｏｐｏｄ Ｎａｓｓａｒｉｕｓ ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔｕｓ ［Ｊ］． Ｔｏｘｉｃｏｎ，２００８，５２：５５－６１．
　　［５］ 郑典元． 不同海滩栖息地半褶织纹螺毒力调查［Ｊ］． 中国公共卫生，２００６，２２（１０）：１２６２．
　　［６］ ＨＷＡＮＧ Ｄ Ｆ， ＣＨＵＥＨ Ｇ Ｈ， ＪＥＮＧ Ｓ Ｓ． Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｐｏｄ ｍｏｌｌｕｓｋ Ｎａｔｉｃａ Ｈｎｅａｔａ（ｌｉｎｅｄ ｍｏｏｎ ｓｈｅｌｌ）［Ｊ］． Ｔｏｘｉｃｏｎ， １９９０，２８：２１－２７．
　　［７］ 于仁成．中国沿海两例食用织纹螺中毒事件中织纹螺体内毒素分析［Ｊ］． 中国水产科学，２００７，１４（５）：８０１－８０６．
　　［８］ ＴＳＡＩ Ｙ Ｈ， ＨＷＡＮＧ Ｄ Ｆ， ＣＨＥＮＧ Ｃ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｕｒｉｎｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｕｓｉｎｇ Ｃ１８ ｃａｒｔｒｉｄｇｅ ｃｏｌｕｍｎ， ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＬＣ－ＭＳ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ， ２００６，８３２（1）：７５－８０．
　　［９］ 阚丽丽，郭 斌． 河豚毒素的提取及检测方法研究［Ｊ］． 中国药房，２００７，１８（２８）：２２２４－２２２６．
　　［１０］ ＡＬＬＥＮ Ｄ Ｔ， ＪＯＮ Ｌ， ＳＴＡＣＥＹ Ｅ ， ｅｔ ａｌ． Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ （ＴＴＸ） ｂｙ ａ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ （ＳＰＲ） ｓｅｎｓｏｒ［Ｊ］． Ｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ａｃｔｕａｔｏｒｓ Ｂ，２００８，１３０：１２０－１２８．
　　［１１］ 张 理，谢克勤，赵金山，等． 用昆明小鼠定量测试河豚毒素的研究［Ｊ］． 中国食品卫生杂志，２００４，１６（６）：４９７－５００．
　　［１２］ 陈伟珠，洪 专，张怡评，等． 河豚毒素的高效液相／荧光精确定量技术研究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００９，１９（２）：２６１－２６２．
　　［１３］ 厚生省生活卫生局监修． 食品卫生检查指针： 理化学编［Ｍ］． 东京：日本食品卫生协会，１９９１． ２９６－２９９．
　　［１４］ 张 农，苏 捷，刘海新，等． 织纹螺毒素来源的研究［Ｊ］． 海洋环境科学，２０１０，２９（５）：７０５－７０７．
　　［１５］ ＣＨＥＮ Ｘ Ｗ， ＬＩＵ Ｈ Ｘ， ＪＩＮ Ｙ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ａｎａｌｏｇｓ ｂｙ ＬＣ－ＭＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｎａｌｏｇｓ［Ｊ］． Ｔｏｘｉｃｏｎ，２０１１， ５７： ９３８－９４３．
　　［１６］ ＷＵ Ｙ Ｊ， ＣＨＥＮＧ Ｙ Ｊ， ＪＥＮ Ｈ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｔａｎｄｅｍ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｉｓｈ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ａ Ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ Ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ Ｆｉｓｈ Ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２０１１，７４：５７８９－５７９５．
　　［１７］ ＦＯＮＦＲIＡ Ｅ Ｓ， ＶＩＬＡＲＩNＯ Ｎ， ＣＡＭＰＢＥＬＬ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ｐａｒａｌｙｔｉｃ Ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ Ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ－Ｂａｓｅｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ｉｎ Ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ Ｍａｔｒｉｘｅｓ［Ｊ］． Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７， ７９（１６）：６３０３－６３１１．

推荐访问:河豚 毒素 荧光 检测