黄曲霉毒素快速检测 SPE法低成本快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1

　　黄曲霉毒素，1993年被世界卫生组织的癌症研究机构划定为1类致癌物。其中黄曲霉毒素B1毒性和致癌性最强，而黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢物，主要存在于牛奶中。卫生部官网一份有关食物中毒的说明文件指出，黄曲霉毒素主要损伤肝脏，致癌性很强，我国乳及乳制品中规定黄曲霉毒素M1限量为0.5ttg／kg。
　　目前检测黄曲霉毒素的方法通常为免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法([uSA)这两种方法。酶联免疫吸附法(LllSA)操作简单，快速，但灵敏度低且会出现假阳性，需使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量，而免疫亲和柱又存在使用繁琐、价格昂贵、储存条件苛刻，保存期短等缺点。
　　迪马科技最新开发的快速ProElutTM固相萃取方法拥有与免疫亲和柱法相当的高精度回收率结果，但使用成本大大降低。ProElutTM固相萃取法单个样品的检测成本为免疫亲和柱法的1／4，酶联免疫法的1／2，同时ProElutTM固相萃取法简单易操作、不需要专用的大型设备、对操作人员要求不高，特别适用于各种乳品生产企业及检测机构，将大大降低黄曲霉毒素的检测成本。
　　1　样品准备／提取
　　(1)牛奶、原料乳等液态奶制品
　　称取5g样品，加入5mL乙腈，涡旋混合1min：再加入10mL乙腈，涡旋混合1min：4000rpm离心5min，取上清液5mL，作为上样液待净化。
　　(2)奶粉、乳酪等固体奶制品
　　称取2g样品，加入5mL水，涡旋混合2min：加入5mL乙腈，涡旋混合1min：再加入1 0mL乙腈，涡旋混合1min：4000rpm离心5min，取上清液5mL，作为上样液待净化。
　　2　SPE柱净化――ProElutTM AFT黄曲霉毒素检测专用柱1500mg／12mL(cat#65904)
　　(1)活化：10mL乙腈，流出液弃去：
　　(2)上样：将上样液加入柱中，接收流出液；
　　(3)洗脱：10mL乙腈洗脱，收集流出液。合并步骤(2)、(3)流出液：
　　(4)重新溶解：在40~C下用减压蒸馏将流出液浓缩至大2mL，向旋蒸瓶中加,／XSmL无水乙醇，继续减压蒸馏近干，用10％乙腈水定容至0.5mL，供HPLC分析。
　　3　分析条件
　　色谱柱：Diamonsi　C18(2)，250mm×4.6mm×5um(Cat#99603)：
　　流速：1.0mL／min；
　　检测器：荧光检测器(Ex：365nm、Em：435nm)：
　　柱温：30℃
　　进样量：20uL
　　流动相：乙腈／水(25／75)。
　　4　添加回收结果
　　(1)牛奶中黄曲霉毒素M1添加回收结果，见表1。
　　5　结论
　　迪马科技为乳制品检测开发的新型，快速，低成本sPE法检测乳制品中黄曲霉毒素M1方法克服了免疫亲和柱方法检测费用高、存储条件苛刻、保质期短等缺点，该方法具有操作简单、结果重现性好、使用成本低、存储方便等优点，特别适合大中型乳品企业，乳品检测机构等采用。
　　迪马科技ProElutTM系列固相萃取柱能够对乳制品基质进行有效地提取和净化，黄曲霉毒素M1回收率高，重现性、稳定性好，检出限结果能够满足国标对于黄曲霉毒素M1的限量标准要求，值得作为种新型的乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方法全面推广。

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