大田软海绵酸和鳍藻毒素-1纯化样品的分析 罗非鱼鳍毒素

　　摘 要 采用高效液相色谱�荧光检测、高效液相色谱�紫外检测、流动注射进样�质谱检测和高效液相色谱�质谱联用分析等方法对从有毒利玛原甲藻（Prorocentrum lima Dodge）中分离纯化的大田软海绵酸（OA）和鳍藻毒素�1（DTX1）毒素样品进行定性鉴定和纯度分析，为毒素标准品的制备提供材料和方法依据。通过柱前衍生、HPLC�FLD分析，可在样品中检测到OA和DTX1与4�溴甲基7�甲氧基香豆素（BrMmc）的衍生物，表明样品中存在OA和DTX1毒素。 HPLC�UV方法在200 nm下的检测结果表明，OA和DTX1是样品色谱图中主要的色谱峰，OA样品和DTX1样品纯度可以达到95%和98%。根据正、负离子模式下流动注射�质谱分析结果，毒素样品和标准品质谱图中信号最强离子的m/z相同，应为OA和DTX1毒素的\�＋和\离子，其裂解方式也基本一致。通过HPLC�MS方法，对样品进行了m/z 200～1000的全扫描分析，发现OA样品中可检测到少量杂质，而DTX1样品中仅检测到DTX1毒素成分。分析结果表明，前期分离纯化的OA和DTX1毒素样品纯度较高，可以在腹泻性贝毒（DSP）毒素液相色谱和液相色谱�质谱联用分析中用作标准毒素。
　　关键词 腹泻性贝毒； 大田软海绵酸； 鳍藻毒素�1； 高效液相色谱�质谱联用�
　　
　　1 引 言�
　　大田软海绵酸（OA）及其衍生物鳍藻毒素（DTXs）是一类亲脂性聚醚类化合物，主要由鳍藻属和原甲藻属有毒甲藻产生��\�。当有毒微藻被双壳贝类滤食后，OA和DTXs毒素会在贝类消化腺内累积。贝类中沾染的OA和DTXs毒素是导致腹泻性贝毒中毒（DSP）的主要毒素成分��\�。食用染毒贝类后，患者会出现腹泻、呕吐等急性中毒症状。研究发现，OA和DTX1引起成人出现中毒症状的最小剂量约为40和�36 1 引 言�
　　大田软海绵酸（OA）及其衍生物鳍藻毒素（DTXs）是一类亲脂性聚醚类化合物，主要由鳍藻属和原甲藻属有毒甲藻产生��\�。当有毒微藻被双壳贝类滤食后，OA和DTXs毒素会在贝类消化腺内累积。贝类中沾染的OA和DTXs毒素是导致腹泻性贝毒中毒（DSP）的主要毒素成分��\�。食用染毒贝类后，患者会出现腹泻、呕吐等急性中毒症状。研究发现，OA和DTX1引起成人出现中毒症状的最小剂量约为40和�36 �SymbolmA@
　　g��\��。除上述急性中毒症状外，OA和DTXs毒素还是蛋白磷酸酶1（PP1）和蛋白磷酸酶2A（PP2A）的抑制物��\�，能够影响蛋白磷酸化过程，促进细胞凋亡和肿瘤形成��\�。其长期毒性效应对贝类养殖业的发展和公众健康构成了严重威胁。香港、深圳、舟山、青岛、烟台、天津等地的海产品中曾检出DSP毒素��\�。�
　　对于OA和DTX1等DSP毒素成分，高效液相色谱�荧光检测法（HPLC�FLD）和高效液相色谱�质谱联用分析法（HPLC�MS）是应用最广的方法��\�。HPLC�FLD法是通过毒素成分与衍生剂的反应，将毒素转化成具有荧光活性的衍生物进行检测。9�蒽重氮甲烷（ADAM）和4�溴甲基7�甲氧基香豆素（BrMmc）等荧光衍生剂常用于OA和DTX1的分析��\�。其中，BrMmc衍生法是一种较成熟、在国内应用较多的DSP毒素分析方法��\�。在实际应用中，这些方法都需要有毒素标准品支持。但是，目前毒素标准品价格昂贵，在一定程度上制约着贝类产品质量控制工作的开展。本研究组曾从培养的有毒利玛原甲藻（Prorocentrum lima Dodge）中分离纯化了一定量的OA和DTX1毒素（实验过程另文发表）。在本研究中，通过HPLC�FLD、高效液相色谱�紫外检测法（HPLC�UV）、流动注射进样�质谱检测法和HPLC�MS等方法，对制备的OA和DTX1毒素样品的性质和纯度进行了分析。2 实验部分�
　　2.1 仪器与试剂�
　　
　　Waters e2695液相色谱系统（美国沃特世公司）； Esquire离子阱质谱仪（美国布鲁克公司）；Agilent 1100高效液相色谱系统（美国安捷伦公司）。�
　　OA和DTX1 毒素样品（加拿大国家研究院海洋生物科学研究所）用甲醇溶解，
　　20 ℃下保存备用。甲醇、乙腈、丙酮（Merck公司）；甲酸（98%，Fluka公司）；4�溴甲基�7�甲氧基香豆素（BrMmc，＞97%），N,N�二异丙基乙胺（＞99%）, 购自�Sigma�Aldrich公司�。自制超纯水。

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