8味中药对腹泻仔猪大肠杆菌抑制试验研究

林松泉

（厦门惠盈动物科技有限公司，福建 厦门 361023）

从腹泻仔猪体内分离出1株大肠杆菌[1]，通过试验发现，该病菌致病性较强，且对大多数的抗生素具有耐药性。随着国家替抗、减抗政策的实施，寻求抗生素替代品具有重要意义。

中草药以天然植物为主，其具有对环境无污染、对机体不产生耐药性及毒副作用低等优点，因而逐渐引起人们的关注[2]。本试验选取市场上较为常见、常用的8味中药，先进行体外抑菌试验，测试其抑菌活性，再通过小鼠体内试验，验证其抑菌活性。同时选取市场上销售的5种复合中药产品进行体外抑菌试验，通过对比试验，分析这8味中药的抑菌效果，并为中药方剂的研究奠定基础。

1.1 试验材料

1.1.1 试验指示菌。大肠杆菌[1]（Escherichia coli）分离自腹泻仔猪。

1.1.2 试验用中药及市场上的中药产品。纯中药鱼腥草、蒲公英、金银花、姜黄、板蓝根、白头翁、黄柏和黄连皆由药店采购。

产品A：黄芪、姜黄、甘草；
产品B：黄柏、黄芪、黄连、板蓝根；
产品C：杜仲、蒲公英、金银花；
产品D：黄芩、黄柏、大青叶；
产品E：白头翁、黄连、黄柏。该5种中药产品皆从市场上采购。

1.2 试验方法

1.2.1 中药前处理。将8味纯中药分别称取100 g，加入500 mL自来水于高压蒸汽灭菌锅中110℃灭菌2 h。过滤，收集滤液后再次进行煮沸浓缩，最终定容至100 mL（此时1 mL中药液相当于1 g原中药），4℃保存备用[3-4]。

将8味纯中药及5种中药产品分别称取100 g，加入500 mL自来水于37℃恒温摇床内180 r/min振荡 2 h。过滤，收集滤液后再次进行煮沸浓缩，最终定容至100 mL（此时1 mL中药液相当于1 g原中药），4℃保存备用。

1.2.2 中药体外抑菌试验。挑取活化后的大肠杆菌菌泥，稀释至活菌数约108CFU/mL，吸取2 mL菌悬液加入50℃保温的200 mL营养琼脂培养基中摇匀，倾倒平板，冷却凝固后将灭菌后的牛津杯置于平板上。向牛津杯中各自加入中药浓缩液0.1 mL，于37℃环境中培养24 h。观察有无抑菌圈产生，并用游标卡尺测量抑菌圈直径大小。

1.2.3 小鼠致病性及治疗试验。选取100只健康小鼠随机分成10组，每组10只，采用选取的8味中药进行小鼠体内抑菌试验。给病菌感染组及8味中药试验组的小鼠腹腔注射菌浓约为106CFU/mL的病菌悬液0.5 mL/只，对照组注射0.5 mL/只的0.85%无菌生理盐水。将8组中药试验组各自按10 mL/kg用药量加入蒸煮炮制的中药浓缩液至日粮及饮水中，10组日常喂食管理一致，饮水自由。连续观察7 d，计算小鼠死亡只数，并剖检死亡小鼠，取脏器进行病菌分离。

2.1 中药体外抑菌试验

将8味中药经过2种不同处理后获得的浓缩液，对大肠杆菌进行抑制试验。试验结果表明，进行简单溶水、浸泡的中药中，鱼腥草、蒲公英、金银花、板蓝根及白头翁对大肠杆菌无抑制效果；
姜黄、黄柏和黄连抑制效果较差，表现为低敏感。对中药进行蒸煮处理后，蒲公英、金银花、姜黄、白头翁、黄柏和黄连对大肠杆菌的抑制效果明显提升，多数表现为中敏感；
鱼腥草、板蓝根则对该大肠杆菌无抑制效果；
而市场上的5种复合中药产品经过浸泡处理，对该大肠杆菌的抑制效果较差或无效果。具体试验结果见表1。

表1 中药体外抑菌效果

通过浸泡、蒸煮2种方式炮制中药，在大肠杆菌的抑制试验中发现，经过蒸煮处理的中药，其抑制大肠杆菌的效果优于浸泡处理方式。说明蒸煮炮制中药能将中药材的有效成分提取出来，使其发挥药性。

2.2 小鼠致病性及治疗试验

采用本试验所选取的8味中药进行小鼠体内抑制大肠杆菌试验，结果见表2。在小鼠体内注射大肠杆菌后的1周，病菌感染组小鼠全部死亡，死亡率达100%。说明该大肠杆菌具有较强的致病性及致死率。采用中药进行治疗的8组中，鱼腥草、板蓝根组小鼠死亡率达100%，其他6组中药组小鼠死亡率为50%～80%。与病菌感染组小鼠死亡率100%相比，对该大肠杆菌具有一定抑制效果的中药为蒲公英、金银花、白头翁和黄柏。

表2 小鼠致病性试验结果

将8味中药经过简单浸泡与高温蒸煮2种不同方式处理后获得的浓缩液，对大肠杆菌进行抑制试验的结果表明，同种中药经过蒸煮处理，其抑制大肠杆菌效果优于浸泡处理方式。说明蒸煮炮制中药能将中药材的有效成分提取出来，使其更好地发挥药性。有研究表明[6]，中药炮制的方法及工艺不同，直接影响临床治疗效果。本研究采用2种不同方式处理中药，其表现出的结果也不同。关于鱼腥草[7]、板蓝根[8]的抑菌活性研究报道结果不一，本研究发现，这2味中药无抑菌效果。另外，本研究中其他中药抑菌活性与别的学者[9-11]的研究结果也不尽相同。综合分析，原因可能为不同来源的大肠杆菌对中药的敏感性不一样[12]，且中药炮制温度及时间不同对药效也有影响[13]。

在小鼠致病性及治疗试验中，鱼腥草、板蓝根组的致死率与病菌感染组一致，达100%，说明鱼腥草、板蓝根无法治疗因大肠杆菌所引起的疾病，该结果与鱼腥草、板蓝根对大肠杆菌无抑制效果的结论相一致。而小鼠死亡率较低的蒲公英、金银花、白头翁和黄柏中药组，其在体外试验中对大肠杆菌抑制效果较好，与该结果也一致。但是黄连在体外试验中对大肠杆菌的抑制效果优于蒲公英、金银花、黄柏，而在小鼠的治疗试验中反而死亡率比蒲公英、金银花和黄柏组高，针对该现象，后续需进一步研究探讨。

通过上述试验研究发现，选取的8味中药对治疗小鼠大肠杆菌的效果较差，效果最优组死亡率仅降低至50%，总体来说治疗效果较差。而于市场上购买的中药产品在抑菌杀菌功效上也相对较低。通常市场上流通的复合中药产品，主要是将常规的中药材进行粉碎后复配而形成，故其药材的有效成分难以溶解出来，加之使用者多直接拌料使用，未做进一步处理，故抑菌杀菌效果较差，甚至无效果。

通过对所选取的8味中药进行体外抑制大肠杆菌及体内治疗小鼠试验发现，蒲公英、金银花、白头翁和黄柏能降低小鼠约50%的死亡率，通过高温蒸煮方式处理的中药能有效提高其抑菌活性。在对市场上5种复合中药的体外抑菌试验中发现，它们抑菌效果较差或无效果。综上分析，经过简单处理的中药制剂，其抑制该大肠杆菌的效果较差。后续将继续深入研究，优化中药炮制方式，提高抑菌活性。

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