STC1在肝细胞癌组织中的表达及对预后的影响*

张甜甜 刘 杨 唐小童 于寒冰 李玉梅 汪 蕊，2

1 蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科，安徽省蚌埠市 233003；

2 癌症转化医学安徽省重点实验室

原发性肝癌是世界范围内癌症相关死亡的第三大原因，其中肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌中最为常见的病理类型[1]。尽管近些年随着外科技术及新药研发的发展，肝癌在诊断及治疗方面均取得了较大的进步，但由于肝癌存在早期临床症状隐匿、恶性程度高、生长速度快、易复发转移等特点，肝癌患者整体预后情况仍不理想[2]。因此，探索肝癌发展机制及寻求潜在的治疗靶点具有重要的临床意义。人斯钙素1(Stanniocalcin 1，STC1)是一种糖蛋白激素，可广泛表达于脊椎动物多种组织中，除调节钙/磷代谢外，还参与血管生成、炎症、生殖、凋亡、妊娠、脑缺血等生理病理过程[3]。近些年，多项研究发现，STC1可在结直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、白血病等多种恶性肿瘤中表达，且和肿瘤患者的临床预后相关。在肝癌组织中STC1的表达水平及其临床意义尚未有详尽研究，因此本研究探讨STC1在肝癌组织中的表达情况及与HCC患者临床病理特征和预后的关系，以明确STC1在肝癌中的作用。

1.1 材料 收集2016年1月—2018 年12月期间就诊于蚌埠医学院第一附属医院并接受手术治疗的肝癌患者临床病理资料，患者均经病理学确诊为肝细胞癌，且手术前未接受包括化疗、放疗和介入等任何抗肿瘤治疗。所有的患者均具有充分的肝癌组织样本和完整的临床病理及随访资料，随访截止时间为 2020年5月。符合上述要求纳入本研究的患者共75例，其中男61例，女14例；
年龄22～76岁，中位年龄49岁；
有淋巴结转移21例，无淋巴结转移54例；
肝硬化38例，无肝硬化37例；
有脉管癌栓26例，无脉管癌栓49例；
肿瘤分化Ⅰ～Ⅱ级57例，Ⅲ级及以上18例；
TNM 分期依据第8版AJCC 标准确定，Ⅰ期35例，Ⅱ期20例，Ⅲ期20例。肝癌组织行常规HE染色，选取含有肿瘤组织的区域行免疫组化染色。同时，通过基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis，GEPIA)网站，分析STC1在肝癌和正常肝组织中RNA测序表达数据。

1.2 试剂及免疫组化染色(IHC) 兔抗人STC1抗体(Anti-Stanniocalcin 1)购买于美国Abcam公司；
免疫组化检测试剂盒(EliVisionTMplus)以及DAB 显色试剂盒购买于中国福州迈新生物科技公司。所有标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm厚连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，EDTA高温高压修复抗原，DAB 显色，苏木精复染。STC1抗体稀释浓度为1∶1 000，用已知阳性切片(PTC)作为阳性对照，用磷酸缓冲盐溶液(PBS)代替一抗作为阴性对照。采用 EnVision两步法进行免疫组织化学染色，所有实验步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 IHC结果判读 STC1阳性染色定义为细胞膜和细胞质中出现棕黄色颗粒染色。应用IHC 半定量法对染色结果分析，随机选择5个高倍镜下视野(×400)，计算每个视野下细胞的染色强度(I)和阳性染色细胞(P)百分比，取其平均值，以H score = I×P 公式计算染色结果。STC1的I评分为：无显色染色(0分)，浅黄色显色染色(1分)，棕黄色显色染色(2分)，棕褐色显色染色(3分)。STC1的P评分为：0%(0分)，1%～25%(1分)，26%～50%(2分)，51%～75%(3分)，76%～100%(4分)。H score= 0分为阴性(-)，H score=1分为弱阳性(1+)，H score=2分为中等阳性(2+)，H score≥3分为强阳性。H score≥2分判定为STC1阳性染色。

1.4 统计学方法 采用SPSS26.0 统计软件进行数据分析，计数资料组间差异性分析采用χ2检验，若理论频数<1采用Fisher确切概率法，生存资料单因素分析采用Long-rank检验，多因素分析采用COX回归模型，检验水准为0.05，P<0.05认为差异具有统计学意义。

2.1 STC1表达与肝癌临床病理特征的关系 75例HCC组织中STC1的阳性表达率为60%(45/75),显著高于癌旁组织中的36%(27/75)，差异具有统计学意义(P<0.05)，见图1。另外，STC1的表达与患者的年龄、性别、有无肝硬化及肿瘤AJCC分期无关(P>0.05)，与脉管癌栓、淋巴结转移及肿瘤分化程度有关(P<0.05)，见表1。

图1 免疫组织化学检测STC1蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达

表1 STC1表达与肝癌患者临床病理特征的关系

2.2 STC1的表达与肝癌患者预后的关系 在75例肝癌患者中，与STC1阳性表达患者(n=45)比较，STC1阴性表达患者(n=30)表现出更长的mOS，且差异具有统计学意义(P<0.05)，见图2。

图2 STC1表达与肝癌患者总生存之间的关系

2.3 肝癌患者预后的多变量COX回归分析 COX回归多因素分析结果显示：AJCC分期、STC1表达及淋巴结转移是影响肝癌患者生存状态的独立危险因素，见表2。

表2 肝癌患者预后的COX回归分析

STC1是一种糖蛋白激素，最早发现于硬骨鱼类肾脏的内分泌腺Stannius小体中，其生理主要作用是调节血清钙和磷的平衡。人类STC1位于染色体8p11.2～p21，作为一种分泌型蛋白发挥作用[4]。近年来，越来越多的证据表明 STC1与肿瘤细胞生长和转移密切相关。STC1是一种与内源性缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factots, HIF)1α密切相关的一种糖蛋白激素，研究证实 HIF-1α是缺氧条件下诱导STC1 mRNA 表达增强的一个关键因子，STC1通过促进缺氧区域的血管生成和提高肿瘤细胞的缺氧耐受性，来维持肿瘤细胞的能量代谢、新血管形成及肿瘤增殖[5]。在人类多种肿瘤样本中，可观察到STC1表达的显著升高，且STC1表达水平的升高多与患者预后不良相关。如Fang等[6]通过检测胃癌患者肿瘤组织及血清中STC1的表达及生存预后分析，发现STC1在胃癌中高表达，并与淋巴结转移、临床分期和 3年无进展生存率明显相关，且在胃癌诊断方面血清中STC 蛋白比CEA和CA199更加敏感。Bai等[7]研究发现，STC1通过影响细胞周期相关蛋白，促进前列腺癌细胞的增殖，可作为前列腺癌诊断新的分子标志物。以上研究提示，STC1参与了肿瘤进展过程，与肿瘤患者预后相关，有可能作为肿瘤新的标志物。因此，STC1也被有些学者建议作为癌症进展的分子标记。

本文通过免疫组化染色检测了STC1在HCC组织中的蛋白表达情况，并分析了STC1的表达与HCC患者临床病理参数及预后之间的关系,结果显示肝癌组织中STC1阳性表达率为60%，STC1的表达与脉管癌栓、淋巴结转移及肿瘤分化程度差有关(P<0.05)。尽管Yeung等[8]研究结果也证实了STC1在HCC组织中高表达，但发现STC1的表达与肿瘤大小呈负相关。然而，Chan等[9]研究发现血清中STC1高表达与肝癌更大的肿瘤直径和更差的5年无病生存相关，并且分泌型STC1通过激活JNK信号通路增强肝癌的转移潜能，揭示STC1可能作为HCC的预后血清生物标志物和治疗靶点。同时我们观察到STC1阳性表达的患者相比较于阴性表达的患者mOS缩短，差异有统计学意义。另外，本研究通过多变量Cox回归分析发现：AJCC分期、STC1表达及淋巴结转移是影响肝癌患者生存状态的独立危险因素。Chan等[9]研究也证明，STC1的单克隆抗体可作为一种HCC患者TACE术后的潜在治疗方法，可通过对抗不良反应来增强TACE的治疗效果。可见，STC1不仅可提示HCC患者的疾病进程和预后，还可能成为HCC治疗的新靶点。本研究为单中心回顾性研究，未获取治疗前血清学样本，且组织样本缺乏癌旁组织对照，因此STC1是否可作为HCC诊断及预后的生物学指标还需进行前瞻性的研究。

综上所述，STC1在HCC中高表达，并和HCC患者不良预后相关，STC1在HCC中可能扮演着癌基因角色，有望成为HCC新的诊断及预后判断标记物，未来针对STC1靶点的治疗有可能为HCC患者带来新的治疗策略。

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