[苄星青霉素细菌内毒素检查法的标准修订]细菌内毒素检测凝胶法

　　[摘要] 目的 修订苄星青霉素及注射用苄星青霉素细菌内毒素检查法的质量标准。 方法 按《中国药典》2005年版二部附录，研究本品对细菌内毒素检查试验的干扰情况。 结果 苄星青霉素及注射用苄星青霉素600 单位/mL浓度对鲎试剂无干扰，可将细菌内毒素检查限值由“每1 000单位小于0.25 EU”提高至“每1 000单位小于0.10 EU”。 结论 修订的标准可行，利于有效控制产品中的致热物质。
　　[关键词] 苄星青霉素；细菌内毒素；干扰试验
　　[中图分类号] R927.12 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）04（a）-0141-03
　　
　　Revision of the criterion for bacterial endotoxinins test of Benzathine Benzylpenicillin
　　LIU Xueli ZHANG Min CHEN Ruhong CUI Xiaoyan
　　Hebei Provincial Institute for Drug Control, Hebei Province, Shijiazhuang 050011, China
　　[Abstract] Objective To revise the criterion for bacterial endotoxins test of Benzathine Benzylpenicillin and Benzathine Benzylpenicillin for injection. Methods The experiment was carried according to the Appendix of Chinese Pharmacopoeia 2005 Vol.Ⅱ. Interference test for bacterial endotoxins test was done. The feasibility of improving the limit for bacterial endotoxins in the products was discussed. Results The concentration of 600 units/mL for Benzathine Benzylpenicillin and Benzathine Benzylpenicillin for injection had no interference to bacterial endotoxins test. The endotoxins test could be improved from “it contains less than 0.25 EU per 1 000 Penicillin Units” to “it contains less than 0.10 EU per 1 000 Penicillin Units”. Conclusion The criterion revised is feasible, which can be used to control effectively pyrogenic substances in the products.
　　[Key words] Benzathine Benzylpenicillin; Bacterial endotoxins; Interference test
　　
　　苄星青霉素为青霉素的二苄基乙二胺盐，又名长效西林，肌注后缓慢游离出青霉素而呈抗菌作用，主要用于预防风湿热复发，也可用于控制链球菌感染的流行[1]。细菌内毒素为革兰氏阴性菌产生的外源性致热原，《中国药典》2005年版二部该品种细菌内毒素检查项下规定“每1 000单位含内毒素的量应小于0.25 EU”[2]；《美国药典》32版内毒素限值为0.01 EU/100单位[3]，即0.10 EU/1 000单位；《欧洲药典》6.0部内毒素限值为0.13 IU/1 mg[4]，相当于0.11 EU/1 000单位。因此我国标准限值亟待提高，严加控制产品中的致热物质，与国际接轨。本实验参考有关文献[5-7]，研究本品对细菌内毒素检查试验的干扰情况，探讨提高本品细菌内毒素限值的可行性，在实验基础上修订质量标准。
　　1 仪器与试药
　　洁净工作台，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司，VS-1300L-U；电热恒温水箱，天津市泰斯特仪器有限公司，HH-W21-600；旋涡混合器，QL-901，江苏海门市麒麟医用仪器厂。
　　苄星青霉素，河北华日药业有限公司，批号：BL1007204、BL1007205、BL1007207；江西东风药业股份有限公司，批号：TB2010007-15、TB200911-8；注射用苄星青霉素，规格：120万单位，江西东风药业股份有限公司生产，批号：100708-2、100709-2、100738-2；华北制药集团北元有限公司生产，批号：10038204、10038205、10048102。
　　鲎试剂1（TAL1，批号：1007300，规格：0.1 mL，灵敏度标示值λ：0.06 EU/mL，湛江博康海洋生物有限公司）；鲎试剂2（TAL2，批号：1007211，规格：0.1 mL，灵敏度标示值λ：0.06 EU/mL，湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素工作标准品1（CSE，批号：150601-201069，规格：120 EU，中国药品生物制品检定所）；细菌内毒素工作标准品2（批号：150601-200968，规格：150 EU，中国药品生物制品检定所）；细菌内毒素检查用水（BET用水，批号：1003090、1007140，规格：50 mL，湛江博康海洋生物有限公司）。
　　2 方法与结果
　　2.1 鲎试剂灵敏度复核试验
　　按《中国药典》2005年版二部附录细菌内毒素检查法[5]对两种来源的鲎试剂进行灵敏度复核试验，结果2λ管均为阳性，0.25λ管和阴性对照管均为阴性，两批鲎试剂灵敏度的测定值λc均在0.5λ～2.0λ范围内，符合规定。以标示灵敏度0.06 EU/mL为两批鲎试剂的灵敏度。
　　2.2 供试品有效稀释浓度计算
　　本实验参考USP32，拟定本品细菌内毒素限值（L）为0.10 EU/1 000单位，则最低有效浓度：C = λ/L=（0.06 EU/mL）/（0.10 EU/1 000单位）=600单位/mL。
　　2.3 供试品干扰预试验
　　将两个厂家两批苄星青霉素（批号：BL1007205、TB2010 007-15）稀释成2 400单位/mL，1 200单位/mL，600单位/mL三个浓度的供试品管（NPC）和含有2λ浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管（PPC）。取TAL1、TAL2两个厂家的鲎试剂，分别于上述NPC和PPC进行反应，每个浓度平行做两支，另分别做阴性对照管（NC）与阳性对照管（PC）各两支，于（37±1）℃保温（60±2）min。结果苄星青霉素2 400单位/mL浓度对TAL2有干扰作用，1 200单位/mL浓度与600单位/mL浓度对两个厂家鲎试剂都无干扰。将两个厂家两批注射用苄星青霉素（批号：100709-2、10038204），同法进行预试验，结果注射用苄星青霉素2 400单位/mL对TAL1有干扰作用，1 200单位/mL对TAL2有干扰作用，600单位/mL对两个厂家鲎试剂都无干扰。
　　2.4 供试品干扰确证试验
　　2.4.1 苄星青霉素的干扰确证试验 根据预试验，将两个厂家三批供试品2 400单位/mL，1 200单位/mL两个浓度进行干扰确证试验，结果见表1。干扰确证试验结果表明，供试品（批号：BL1007205）2 400单位/mL对TAL2表现为Et（0.02 EU/mL）小于0.5Es（0.03 EU/mL），存在干扰作用；三批供试品1 200单位/mL Et均在0.5Es～2.0Es之间，可认为在此浓度下供试品对鲎试剂无干扰作用。
　　2.4.2 注射用苄星青霉素的干扰确证试验 根据预试验，将两个厂家三批供试品1 800单位/mL、600单位/mL两个浓度进行干扰确证试验，结果见表2。干扰确证试验结果表明：供试品（批号：10038204）1 800单位/mL对TAL2表现为Et（0.02 EU/mL）小于0.5Es（0.03 EU/mL），存在干扰作用；三批供试品600单位/mL Et均在0.5Es～2.0Es之间，可认为在此浓度下供试品对鲎试剂无干扰作用。
　　2.5 样品细菌内毒素检查
　　分别取上述11批样品，将其稀释至600单位/mL（即最低有效浓度），以灵敏度0.06 EU/mL的TAL1，按《中国药典》2005年版二部附录细菌内毒素检查法，以检查限值为0.10 EU/1 000单位进行检测，结果11批样品均符合规定。
　　3 讨论
　　药品细菌内毒素检查是一种限度试验，当供试品含内毒素低于这个限值时，按规定给药途径用药，就不会引起致热原反应。《中国药典》2005年版二部附录一般按下式计算内毒素限值：L = K/M，其中注射剂K = 5 EU/（kg・h），M为人用每千克体重每小时最大剂量，人均体重按60 kg计算，注射时间小于1 h的按1 h计[8]。人用最大剂量一次120万单位[1]，则M = 20 000单位/（kg・h）。按公式计算内毒素限值：L = 0.25 EU/1 000单位，为原标准规定限值。
　　在实际操作过程中，根据惯例或者提高药品质量的要求，一般各国药典均在上述计算最高限度基础之上将限度要求提高2～3倍。参考国外药典，拟定内毒素限度0.10 EU/1 000单位。以上干扰实验表明，苄星青霉素及注射用苄星青霉素部分产品在较高浓度时对细菌内毒素检查有一定的干扰，在600单位/mL浓度对鲎试剂无干扰。因此，在修订标准中规定检测浓度600单位/mL，将限度由“每1 000单位小于0.25 EU”提高至“每1 000单位小于0.10 EU”是可行的。
　　[参考文献]
　　[1] 统一药品说明书及批准文号专项工作小组.国家药品标准化学说明书内容汇编[S].2005：67-68.
　　[2] 国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京：化学工业出版社，2005：227-228.
　　[3] The United States Pharmacopeial Convention.U.S. Pharmacopoeia [S]. 32th Revision. U.S.：United Book Press，2009：3225.
　　[4] The European Pharmacopoeia Commission. European Pharmacopoeia [S]. 6th. Strasbourg：EDQM，2007：1283-1285.
　　[5] 中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规程[S].北京：中国医药科技出版社，2005：287-297.
　　[6] 王海燕.从细菌内毒素累加的性质看全面质量管理[J].中国现代医生，2007，45（9S）：102-103.
　　[7] 高建梅，严新民，董虹，等.CIK细胞悬液细菌内毒素检测方法的研究[J].中国现代医生，2009，47（5）：24-25.
　　[8] 宋招弟.盐酸丁咯地尔氯化钠注射液细菌内毒素检查[J].中国现代医生，2008，46（33）：94-94，96.
　　（收稿日期：2012-02-13 本文编辑：卫 轲）

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